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塑料包埋制片技術

2012-08-27 09:35 閱讀:6539 來源:愛愛醫(yī) 責任編輯:潘樂樂
[導讀] 用塑料包埋切片能制備高質量的組織切片,與石蠟切片相比,具有細胞收縮小、結構清晰、分辨力高等優(yōu)點,但由于操作復雜,費時又費刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少會有人使用此方法。 1、取材:要求修成2mm厚的薄片。 2、固定:10%中性福馬林或Bouin's

    用塑料包埋切片能制備高質量的組織切片,與石蠟切片相比,具有細胞收縮小、結構清晰、分辨力高等優(yōu)點,但由于操作復雜,費時又費刀,故除骨髓等有特殊要求的切片外,很少會有人使用此方法。

    1、取材:要求修成2mm厚的薄片。

    2、固定:10%中性福馬林或Bouin's液。根據(jù)標本大小固定時間為:2~4小時不等。

    3、脫水:組織塊脫水用梯度酒精(80%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ)。較大的組織(10x15x2mm)每步30~60分鐘;中等組織(5x5x2mm),每步15~20分鐘;小組織(3x3x2mm),可不脫水,直接入浸透液。骨髓組織可用5%硝酸脫鈣,或不脫鈣直接脫水、包埋。脫水時間比同樣大小的組織長2~3倍。

    4、浸透:取甲基丙烯酸-2-羥基乙基酯(HEMA)95ml,聚乙二醇(PEG-400)8ml,過氧化苯甲酰0.7g,混勻溶解后置于棕色瓶,4℃?zhèn)溆谩=笗r間為24~48小時,其間更換一次浸透液。

    5、包埋:A液:即浸透液。B液:PEG-40020Nml,N-N二甲基苯胺1ml混合,搖勻溶解后置于棕色瓶,4℃?zhèn)溆谩0駝┍仨氃谑褂们芭渲?,按A、B二液以100:3的比例混合,稍加攪拌便可使用。經(jīng)浸透的組織塊置于塑料模具內(nèi),注入包埋劑,放置30~60分鐘(室溫高于18℃可放置于冰箱中),待包埋劑完全滲入組織后,在包埋模具上加蓋,在室溫中放置,使其聚合,成型后便可切片。

    6、切片:先用鋼銼修整聚合塊,四周盡量修至靠近組織,表面修至組織完全暴露,用常規(guī)石蠟切片機切片。切片厚度可切1~2цm。

    7、展片與烤片:用40~42℃水溫展片,撈至趕緊載玻片,60~80℃的溫箱烤片1小時左右。

    8、染色與封片:塑料切片染色前不必脫去包埋劑,直接染色。蘇木素3分鐘,水洗,鹽酸酒精分化1~2秒鐘,水洗,溫水藍化,伊紅2-5秒鐘,水洗,吹干后中性樹膠封固。


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